技术方案与应用案例

一、产品介绍

南京赛泓瑞生物科技有限公司所提供的永生化小鼠肝枯否细胞（Kupffer细胞），是一种高可靠性的体外模型，广泛应用于肝脏炎症反应及相关疾病的病理机制研究。以下是我们利用该产品进行的一项实例分享。

二、实验方法

我们从南京赛泓瑞生物科技有限公司获取的永生化小鼠肝枯否细胞，置于含有10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素的DMEM培养基中，于37°C、5%CO2的培养箱中进行培养。当细胞生长至80-90%汇合时，使用0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液进行消化，随后按1:4的比例进行传代。实验中使用的药物溶解于DMSO中，配制成不同浓度的储存液，以-20°C储存。将细胞接种至96孔板中，每孔接种约5×10^3个细胞。24小时后，更换为含有不同浓度药物的新鲜培养基，实验分为对照组（仅含DMSO）和实验组（不同浓度药物），每组设置6个复孔。

药物处理24小时后，向每孔中添加20µL的5mg/mL MTT溶液，并在培养箱中继续培养4小时。随后，去除MTT溶液，每孔加入150µL DMSO，震荡10分钟以溶解甲臜晶体，使用酶标仪在570nm波长处测量吸光度（OD值）。在药物处理结束后，收集细胞培养上清液，按照ELISA试剂盒说明进行操作，检测上清液中的TNF-α和IL-6含量。数据分析使用GraphPad Prism软件，组间比较采用单因素方差分析（ANOVA）进行Tukey’s多重比较检验，所有数据以平均值±标准差（SD）表示，P值小于0.05被视为具有统计学意义。所有实验至少重复三次以确保结果的可靠性。

三、实验结果

在本次实验中，与对照组比较，实验组中药物处理的永生化小鼠肝枯否细胞表现出显著降低的细胞活力（P<0.05）以及增加的TNF-α和IL-6水平（P<0.05），提示该药物可能具有抗炎作用。

四、结语

南京赛泓瑞生物科技有限公司的永生化小鼠肝枯否细胞为肝脏炎症研究提供了稳定且可靠的实验工具。我们的应用案例显示，该产品在药物筛选及炎症机制研究中发挥了重要作用。期待与广大科研工作者携手，进一步推动肝脏疾病研究的进展。