人胃癌细胞MGC803培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人胃癌细胞MGC803

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P

传代方法：建议第一次以1:2比例进行传代

备注：使用无菌离心管收集培养基，留作过渡对比培养，若对比培养效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

为确保细胞健康，收到细胞后应尽快培养至良好状态并灌满完全培养液，封好瓶口。此方法是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，首先使用75%酒精对整个细胞瓶进行喷洒消毒，随后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态，再进行后续操作。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数（建议40x，100x，200x各一张）保存，前三天的照片将作为重要的售后依据，未提供照片将默认细胞状态良好。在传代后，建议使用原瓶的完全培养基对比自配的培养基，以方便进行后续分析，换液后请将瓶盖稍微松动。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，将瓶中完全培养液收集至离心管，留5ml培养基在37℃、5% CO2的孵箱中培养；若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，置于37℃的培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞情况。若细胞大部分变圆并脱落，立即拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打使细胞完全脱落后，吸出悬液并转移至15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后置于37℃、5% CO2的培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，经过显微镜观察，待细胞收缩变圆后加入5ml完全培养液以终止消化，然后轻轻吹打使细胞脱落，转移悬液至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，细胞沉淀后加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 冻存细胞可直接放入-80℃冰箱中，若后续需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放至少24小时。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），迅速将其置于37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，细胞沉淀后重悬于5ml完全培养基，接种至T25培养瓶中，放入37℃、5% CO2的培养箱中培养。
4. 翌日换用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能会出现脱落的现象，这是正常情况。若脱离较多，可以将培养瓶中的所有培养液收集至离心管中，1000 RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养。对沉淀细胞加入1-2ml胰蛋白酶，轻轻吹打后重悬并消化1-2分钟，加入5ml完全培养基终止反应。再次离心后弃上清，加1-2ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2的培养箱中进行培养。

五、售后条款

对于细胞的售后服务及问题处理如下：

1. 细胞出现问题，可重发的情况：
   1. 运输过程中出现问题（如细胞丢失、瓶身破损、培养液严重泄漏），可申请重发；
   2. 接收到细胞后48小时内若出现污染，需提供实验结果，确认后可重发；
   3. 常温发货的细胞在静置24小时、干冰冻存发货的细胞在复苏后24小时若绝大多数细胞未存活，需提供真实清晰的细胞状态照片，确认后可重发；
   4. 干冰发货细胞复苏后24小时或常温发货细胞静置4小时未开封、出现污染，亦可申请重发；
   5. 对于细胞活性问题，需在收到产品7天内提供真实的实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定活力，确认后可重发；
   6. 收到细胞后当天及第2、3天拍照，若超过3天未告知则视为合格。4-7天内的问题需提供收到细胞前3天的照片及出现问题时的照片，并与技术人员沟通，由技术人员判定责任情况。
2. 不予以重发的情况：
   1. 客户自行造成的细胞污染，不可重发；
   2. 不当操作导致的细胞状态不佳，不可重发；
   3. 非本库推荐培养体系导致的问题，不可重发；
   4. 若细胞状态不佳且未提供培养前3天图片，亦不可重发；
   5. 如细胞培养过程中经过其他处理，不可重发；
   6. 收到细胞2天内未告知的问题，不可重发；
   7. 具体情况需进一步讨论。

以上为ag尊龙凯时对于人胃癌细胞MGC803的培养与管理说明，确保在专业和安全的环境中操作，以期待您获取最佳的实验结果。